間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)與使用注意事項(xiàng)

更新時(shí)間：2025-10-30

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臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（hUC-MSCs）是從新生兒臍帶中提取的一種具有多潛能分化能力的干細(xì)胞。臍帶來源的間充質(zhì)干細(xì)胞不僅保持了間充質(zhì)干細(xì) 胞的生物學(xué)特性（表面抗原標(biāo)記物，具有分化為成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞及脂肪細(xì)胞等能力），而且相對(duì)于其它來源的間充質(zhì)干細(xì)胞更加安全，更加原始，細(xì)胞的增殖、分化及免疫調(diào)節(jié)能力更強(qiáng)。

此外臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞還具取材方便易于分離、免疫原性低、無道德倫理問題限制、可獲得的細(xì)胞數(shù)量多、可實(shí)現(xiàn)大規(guī)模標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)等特征，擁有廣闊的臨床應(yīng)用前景。本產(chǎn)品經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量控制和檢測，確保其安全性和有效性。

（1）當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)80%-90%即可進(jìn)行傳代（注意細(xì)胞不能太密集，否則容易分化），棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的DPBS潤洗細(xì)胞1-2次；

（2）加1mL重組胰酶于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-3min，在顯微鏡下觀察，直到細(xì)胞大部分細(xì)胞變圓并脫落（視細(xì)胞情況而定）。

（3）加后裝入無菌離心管中，1000rpm離心5min，棄入3ml MSC培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻去上清液，補(bǔ)加1-2ml MSC培養(yǎng)基后吹勻。

（4）按照1：3或者1：4的比例進(jìn)行傳代，或者細(xì)胞計(jì)數(shù)后以5-8×103cells/cm2 濃度接種至新的培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充相應(yīng)體積的MSC培養(yǎng)基后，置于37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

(5) 每2-3天換一次液，培養(yǎng)到2-4天待細(xì)胞生長密度達(dá)到80%左右，進(jìn)行后續(xù)的傳代或者凍存操作。

‌消化時(shí)間‌：胰酶消化需控制在1分鐘左右，避免過度消化導(dǎo)致細(xì)胞損傷‌。

‌接種密度‌：按底面積1:3至1:4比例傳代，避免過密或過稀‌。

‌代次選擇‌：建議使用低代次細(xì)胞（如P2代）以保證實(shí)驗(yàn)效果‌。

‌專用培養(yǎng)基‌：使用含生長因子的專用培養(yǎng)基，促進(jìn)細(xì)胞增殖和分化‌。

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